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313 人阅读发布时间:2020-06-03 18:22
尽管新的转染试剂在不断涌现,一代更比一代强,但面对原代细胞,它们的效果仍然不尽如人意。于是,日本名古屋大学的研究人员做了一个大胆的尝试,将两种知名的转染试剂结合使用,竟然取得了不错的效果。下面,我们就来看看他们是怎么做的。
目前,脂质体转染试剂被广泛使用,因为它们使用简便,也不需要特殊设备。不过,这些试剂在原代细胞上的转染效果不佳。为了解决这个问题,研究人员决定组合使用Lipofectamine LTX和FuGENE HD这两种试剂,来转染原代成纤维细胞和成肝细胞。
研究人员从小鼠胚胎中分别获取了原代成纤维细胞和成肝细胞。他们将pRL-CMV质粒转染到细胞内,以检验转染效率。pRL-CMV来自Promega公司,它在CMV启动子的控制下组成型表达海肾荧光素酶。因此,利用双荧光素酶报告基因检测系统可以确定转染效率。
当然,转染效率的提高也不能以细胞死亡为代价。于是,研究人员又利用Promega的CellTiter-Glo细胞活力检测系统来评估细胞活力。他们通过光度计测量仪来测定相对光强度(RLU),以反映荧光素酶活性或细胞活力。
研究结果表明,Lipofectamine LTX和FuGENE HD的结合使用提高了原代成纤维细胞的转染效率。另外,Lipofectamine LTX在购买时还附带了一种Plus试剂。根据说明,在转染过程中添加Plus试剂可提高转染效率。研究人员也尝试着添加Plus试剂,发现转染效率的确有上调。