小鼠胶原酶I（Collagenase I）elisa免疫组化试剂盒双抗体夹心法

小鼠胶原酶I（Collagenase I）elisa免疫组化试剂盒双抗体夹心法：
1.包被：用0.05MPH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/ml。在每个聚苯乙xi板的反应孔中加0.1ml，4℃ 过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗涤，下同）。
2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃ 孵育1小时。然后洗涤。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小时，洗涤。
4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分钟。
5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
双抗原夹心法的简要操作步骤为：
1）先加入抗原，使抗体固定结合于载体表面；
2）再加样品，使目标检测抗体形成抗原-抗体复合物；  
3）加酶标抗原；
4）加入酶促反应底物，发生显色反应，显色的深浅与待测抗体的量成正比。
上面是ELISA产品管理的相关信息您都掌握好了吗？一定要好好牢记哦，对您的科研实验定会有很大帮助呢！