- 移动端
上海研生实业有限公司品牌商
9 年
手机商铺
商家活跃：
产品热度：
- NaN
- 0
- 0
- 2
- 2
推荐产品
公司新闻/正文
知识分享——细胞复苏时需要注意的那些事儿
762 人阅读发布时间：2022-03-31 13:55
今天我们来聊聊，细胞复苏时需要注意的那些事儿。细胞复苏的原则：快速融化必须将冻存在-196℃ 液氮中的细胞快速融化至 37℃，使细胞外冻存时的冰晶迅速融化，避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶，对细胞造成损害。
01、实验前准备
1. 将水浴锅提前预热至 37℃
2. 细胞实验室进行常规消毒，用 75% 酒精擦拭紫外线照射 40 min 的超净工作台台面，保证无菌。
3. 在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等即将使用的耗材及试剂。
02、取出冻存管
1. 根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。
2. 从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
03、迅速解冻
1. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
2. 约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。 
04、平衡离心
1. 用架盘天平平衡后，放入离心机中 3000r/min 离心 3 分钟。
05、制备细胞悬液
1. 吸弃上清液。
2. 向离心管内加入 10 ml 完全培养液，吹打制成细胞悬液。
3. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，放入培养箱中培养。
06、细胞计数
1. 细胞浓度以 5×105/ml 为宜。
07、培养细胞
1. 将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入 37℃，5%CO2 的培养箱内 2-4 h（或者 24-48 h）后换液继续培养培养，换液的时间根据细胞情况而定。
08、记录复苏日期
1. 将水浴锅提前预热至 37℃
2. 细胞实验室进行常规消毒，用 75% 酒精擦拭紫外线照射 40 min 的超净工作台台面，保证无菌。
3. 在超净工作台中按次序摆放好消过毒的离心管、吸管、培养瓶等即将使用的耗材及试剂。
02、取出冻存管
1. 根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的对应编号。
2. 从液氮罐中取出细胞盒，取出所需的细胞，同时核对管外的编号。
03、迅速解冻
1. 迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻，并要不断的摇动，使管中的液体迅速融化。
2. 约 1-2 min 后冻存管内液体完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁，再拿入超净台内。
1. 用架盘天平平衡后，放入离心机中 3000r/min 离心 3 分钟。
05、制备细胞悬液
1. 吸弃上清液。
2. 向离心管内加入 10 ml 完全培养液，吹打制成细胞悬液。
3. 用培养液悬液混悬沉淀细胞，调整细胞浓度，放入培养箱中培养。
06、细胞计数
1. 细胞浓度以 5×105/ml 为宜。
07、培养细胞
1. 将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内，将培养瓶放入 37℃，5%CO2 的培养箱内 2-4 h（或者 24-48 h）后换液继续培养培养，换液的时间根据细胞情况而定。
08、记录复苏日期