胡桃源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则

胡桃源性成分探针法荧光定量PCR试剂盒通用原则:

1, 先选择好探针,然后设计引物使其尽可能的靠近于探针。

2, 扩增子的长度应不超过400bp,理想的*能在100-150bp内,扩增片断约短,有效的扩增反应就越容易获得。较短的扩增片断也容易保证分析的一致性

3, 保持GC含量在20%和80%之间,GC富含区容易产生非特异反应,从而会导致扩增效率的降低,及在SG分析中非特异信号。

4, 为了保证效率和重复性,应避免重复的核苷酸序列,尤其是G(不能有4个连续的G)

5, 将引物和探针互相进行配对检测,以避免二聚体和发卡结构的形成。

b),探针设计指导

1,在设计引物之前设计探针

2,探针的Tm值应在68-70℃之间,如果是目测探针,则要仔细审查GC富含区。

3,探针的5’端要避免有鸟氨酸,5’G会有淬灭作用,即使被切割下来这种淬灭作用也还会存在

4,选择C多于G的链作探针,G的含量多于C会降低反应效率,这时就应选择配对的另一条链作为探针。

6, 探针应尽可能的短,不要超过30个bp。

7, 检测探针的DNA折叠和二级结构。
成人真皮成纤维细胞完全培养基
人皮下脂肪细胞完全培养基
人内脏脂肪细胞完全培养基
人软骨细胞完全培养基
人表皮黑色素细胞完全培养基
人破骨细胞完全培养基
人皮肤肥大细胞完全培养基
人成骨细胞完全培养基
人脂肪细胞完全培养基
人表皮角质形成细胞完全培养基
人前脂肪细胞完全培养基
人脑动脉血管内皮细胞完全培养基
人脑动脉血管平滑肌细胞完全培养基
人脑静脉血管内皮细胞完全培养基
人脑静脉血管平滑肌细胞完全培养基
人脑膜细胞完全培养基
人神经元细胞完全培养基
人神经少突起前质胶质细胞完全培养基
人神经星形胶质细胞完全培养基
人神经小胶质细胞完全培养基
人脑微血管内皮细胞完全培养基
人脑成纤维细胞完全培养基
人小脑颗粒细胞完全培养基
人晶状体上皮细胞完全培养基
人角膜上皮细胞完全培养基
人视网膜色素上皮细胞完全培养基
人视网膜微血管内皮细胞完全培养基
人角膜成纤维细胞完全培养基
人小梁网细胞完全培养基
人视网膜muller细胞完全培养基