FGFR4抑制剂(H3B-6527)使用实验报告

FGFR4抑制剂(H3B-6527)使用实验报告：

一、分离与培养：

    1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，后将组织剪成1mm3左右大小；

    2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

    3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织完全被消化；

    4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

    5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；
             
二、免疫荧光鉴定：

    1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

    2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

    3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

    4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

    5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

    6、用PBS冲洗3次，每次10min，后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
维生素E(VE)ELISA试剂盒
维生素D受体(VD R)ELISA试剂盒
维生素D结合蛋白(DBP)ELISA试剂盒
维生素D3(VD3)ELISA试剂盒
维生素D2(VD2)ELISA试剂盒
维生素D(VD)ELISA试剂盒
维生素C(VC)ELISA试剂盒
维生素B6(VB6)ELISA试剂盒
维生素B3(VB3)ELISA试剂盒
维生素B2(VB2)ELISA试剂盒
维生素B12(VB12)ELISA试剂盒
维生素B1(VB1)ELISA试剂盒
维生素A(VA)ELISA试剂盒
微量转铁蛋白(MTF)ELISA试剂盒
微管相关蛋白2(MAP-2)ELISA试剂盒
微管相关蛋白1A/1B轻链3B(MAP1LC3B)ELISA试剂盒
微管相关蛋白1A/1B轻链3A(MAP1LC3A)ELISA试剂盒
微管微丝交联因子1(MACF1)ELISA试剂盒
微管多特异性有机阴离子转运蛋白2(ABCC3)ELISA试剂盒
微管多特异性有机阴离子转运蛋白1(ABCC2)ELISA试剂盒
网膜素(omentin)ELISA试剂盒