M15（pREP4） 感受态细胞细胞培养操作规程

M15（pREP4） 感受态细胞细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
小鼠二肽基肽酶Ⅳ(mouse DPP4)
小鼠β内啡肽(mouse β-EP)
小鼠表皮生长因子(mouse EGF)
小鼠表皮生长因子受体(mouse EGF R)
小鼠内皮素-1(mouse Endothelin-1)
小鼠噬酸性粒细胞趋化因子(mouse Eotaxin)
小鼠促红细胞生成素(mouse EPO)
小鼠红细胞生成素受体(mouse EPOR)
小鼠嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(mouse ECP)
小鼠上皮中性粒细胞活化肽-78(mouse ENA-78)
小鼠血管内皮抑素(mouse Endostatin)
小鼠内皮细胞一氧化氮合酶(mouse eNOS)
小鼠雌二醇(mouse E2)
小鼠促卵泡素(mouse FSH)
小鼠凋亡相关因子(mouse Fas)
小鼠凋亡相关因子配体(mouse Fas Ligand)
小鼠酸性成纤维生长因子(mouse a-FGF)
小鼠碱性成纤维生长因子(mouse b-FGF/FGF-2)
小鼠Fibronectin（mouse Fibronectin）
小鼠Flt3(mouse Flt3)
小鼠Flt3配体(mouse Flt3 Ligand)