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紫苏梗LAMP鉴定试剂盒使用方法
142 人阅读发布时间：2023-07-25 14:06
紫苏梗LAMP鉴定试剂盒使用方法：
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议在样品制备区域加入阳性对照。
phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-AKT1+2+3 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体
phospho-AKT1 磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
3-Apr 凋亡相关蛋白3抗体
ATG18 自噬相关蛋白18抗体
ATG4A 自噬相关蛋白4A抗体
APOA4 载脂蛋白A4抗体
ALOX12 12脂氧合酶抗体
Angiotensin III 血管紧张素III抗体
ADCY3 腺苷酸环化酶3抗体
Angiomotin 血管动蛋白抗体
Adenovirus 5 E1A 腺病毒早期E1A蛋白抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATXN1 磷酸化失调症蛋白1抗体
ANKRD17 锚蛋白重复结构域蛋白17抗体
ARL3 ADP核糖基化样因子ARL3抗体
15 Lipoxygenase 1 花生四烯酸15脂氧合酶1抗体
ABC2 乳腺癌增强蛋白2抗体
Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗体
Alpha B Crystallin α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体
ADORA2B 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
ARK5 AMPK的相关蛋白激酶5抗体
ANP32C 致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体
Adenosine deaminase 腺苷脱氨酶抗体
一、样品采集：
1、食品样品：样品的采集与预培养按照样品的采集与预培养按照《食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验要求进行。
2、血液样品：用无菌注射器抽取受检者静脉血2mL，注入无菌EDTA2Na(或柠檬酸钠)抗凝管，立即混匀。
3、粪便样品：取粪便置于灭菌的收集管中送检。
4、病灶部位样品：取发病部位新鲜渗出物、粘液脓血送检。
一、稀释 PCR 阳性对照（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）
1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的 DNA段作为阳性对照。
2. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
3. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液（用带芯枪头，下同）。
4. 在 7 号管中加入 5 μL 1×10E8 拷贝/μL 的阳性对照，充分震荡 1 分钟，得1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
注：上述样品建议经过增菌后，收集培养物用于检测。
二、DNA提取：
可采用PCR试剂盒配备的DNA抽提液，按以下说明进行DNA核酸的粗提。也可采购上海泽叶生物科技有限公司生产的DNA提取试剂盒(过柱法-荧光配套)或其他合适的商业化产品，并按照相应试剂盒说明进行操作。
1、液体培养物：取液体培养物100μL加到1.5mL无菌离心管中，8000rpm离心3min，尽量吸弃上清，加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
2、固体培养物：挑取单克隆菌落与50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min，取上清5μL进行PCR反应。
3、粪便样品：挑取米粒大小粪便于灭菌离心管中，加入0.5mL生理盐水，振荡混匀，13000rpm离心3分钟，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
4、其他液体标本：取标本2-3mL，13000rpm离心3min，弃上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混匀，100℃恒温10min，13000rpm离心3min取上清5μL进行PCR反应。
注：阳性对照和阴性对照为已经抽提好的核酸(无需提取)，直接取5μL加入到反应体系中即可。由于阳性对照浓度较高，建议在样品制备区域加入阳性对照。
phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-Androgen Receptor 磷酸化雄激素受体抗体
phospho-AKT1+2+3 磷酸化蛋白激酶AKT1,2,3抗体
phospho-AKT1 磷酸化蛋白激酶B抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
3-Apr 凋亡相关蛋白3抗体
ATG18 自噬相关蛋白18抗体
ATG4A 自噬相关蛋白4A抗体
APOA4 载脂蛋白A4抗体
ALOX12 12脂氧合酶抗体
Angiotensin III 血管紧张素III抗体
ADCY3 腺苷酸环化酶3抗体
Angiomotin 血管动蛋白抗体
Adenovirus 5 E1A 腺病毒早期E1A蛋白抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATF2 磷酸化活化复制因子2抗体
phospho-ATXN1 磷酸化失调症蛋白1抗体
ANKRD17 锚蛋白重复结构域蛋白17抗体
ARL3 ADP核糖基化样因子ARL3抗体
15 Lipoxygenase 1 花生四烯酸15脂氧合酶1抗体
ABC2 乳腺癌增强蛋白2抗体
Alpha 1 microglobulin α1微球蛋白抗体
Alpha B Crystallin α晶状体球蛋白B/αB-crystallin抗体
ADORA2B 腺苷A2b受体/神经生长因子1受体抗体
ARK5 AMPK的相关蛋白激酶5抗体
ANP32C 致瘤磷蛋白32相关蛋白1抗体
Adenosine deaminase 腺苷脱氨酶抗体