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在细胞转染过程中可能影响最终的实验结果的条件有哪些
发布时间：2024-03-11 10:24 点击次数：
在细胞转染过程中，以下条件可能影响最终的实验结果：
1、培养基配方：无血清，不影响转染，能够支持高密度细胞生长细胞培养基是盐、碳水化合物、维生素、氨基酸、代谢前体、微量元素等形成的的复杂混合物。在进行细胞培养时，通常还需要加入一些添加物，例如血清、抗生素等，有时还需要根据培养需要加入一些特殊的生长因子。但对于不同细胞系/种类来说，培养他们时所需要的营养成分各不相同，因此选择适合某一类/一种细胞的细胞培养基尤为重要。目前市面上有多种不同类型的培养基，包括用于常规贴壁培养的培养基和适用于无血清悬浮培养的培养基，例如 OpiM-MEM 无血清培养基、Freestyle293 表达培养基、RPMI-1640、MEM、DMEM 高糖/低糖等。
但有些培养基虽然能够增加细胞活力，但却对转染及生产存在不利影响。因此筛选一种合适的培养基是至关重要的。此外，对于使用 Polysciences 转染试剂的客户来说，小编建议您在进行转染操作时，推荐使用如下表所示的培养基种类。
另外，血清是一种包含生长因子及其他辅助因子的不确切成分的添加物，对不同细胞的生长作用有很大的差别。血清质量的变化直接影响细胞生长，因此，选择适合的血清种类也相当重要。由于血清中不确定成分/蛋白因子的存在，在转染过程中可能会影响转染效率，因此小编建议您在转染前使用无血清或低血清（2%-5%）细胞培养基进行细胞培养。
但是，如果选用培养基作为质粒 DNA 与 PEI 孵育时的稀释液，在整个转染复合体形成的过程中须严格限制血清的使用（应使用无血清培养基作为稀释液），因为有些血清中的一些蛋白因子会阻碍质粒 DNA 与 PEI 的结合，导致转染效率的下降。此外，对新加培养基进行预热对细胞转染很有帮助。
2、培养空间：摇瓶中培养基总体积不超过培养瓶总体积的 20%（总体积 < 500 ml）或 30%（总体积 > 500 ml）对于使用悬浮细胞进行蛋白/病毒生产来说，在进行大规模生产之前在小体积模型中进行条件摸索及优化是必不可少的一个环节。不少用户会选择在 125/250/500 ml 摇瓶中进行条件探索，一方面经济节约，另一方面能够快速得到大致的结论，但是在此过程中培养的总体积对产量的影响是经常被忽略的一点，往往会认为更大的培养体积有利于提升产量，然而当培养总体积过大时往往会导致后期培养瓶中营养匮乏，氧气浓度不足以支撑细胞正常生长，造成细胞受损等，导致实验屡屡受挫，结果难达预期。
那么该如何选择合适的培养体积以达到更大的生产效果呢？
建议当使用总容量小于 500ml 的摇瓶时，细胞培养总体积不超过培养瓶总体积的20%，其中在15%-20%为宜；当培养瓶总容量大于 500ml 时，细胞培养总体积不超过培养瓶总体积的 30%，其中维持在 25%-30% 为宜。
3、细胞：选用处于对数生长期，活力高，代次低（30 代以内）的细胞进行转染细胞质量是影响转染效果的重要因素之一。
（传代）细胞状态良好，处于对数生长期的细胞转染效果最佳（对于每个细胞来说，倍增时间越短，转染效率越高）。因此，使用高质量细胞系是保证生产指标的一项重要因素。细胞在经过长时间（数年）传代之后往往会经历突变、染色体重组或基因调控改变等，这可能会导致细胞的行为发生改变，影响原有的细胞功能。也就是说，在一株细胞系经过数百甚至数千次传代之后，与相同细胞系低代次的细胞相比其生物学性状可能会发生不同程度的改变，其中一些改变可能导致与转染相关的细胞行为受到影响。一般来说，低细胞代数能确保基因型不变。
更适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞，此时细胞生长旺盛，最容易转染。同时，小编建议在进行抗体/病毒生产时，所转染细胞的传代数最好不超过30代。因此，如果发现转染效率降低，可以试着转染新复苏的细胞以恢复最佳结果。
另外，如果选择贴壁细胞来执行生产任务，那么细胞汇合度是影响转染的因素之一。细胞需要一定的汇合水平才能发挥最佳作用。事实上，这是因为细胞间所发生的相互作用，换句话说，细胞之间的直接接触和细胞通讯，以及细胞和细胞之间通过分泌因子进行的细胞交流，是保证细胞生长和分裂的基本需求，也是保证细胞高质量生长的关键要素。总之，细胞的各项指标，包括倍增时间、传代次数和细胞汇合水平等都可能改变细胞的生物学行为，从而对转染产生一定程度的影响。在转染时最好选用处于对数生长期，活力高，代次低（30 代以内）的细胞进行转染。