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159 人阅读发布时间:2025-08-07 15:41
在选购ELISA试剂盒时,除了关注灵敏度、特异性和批间差等核心指标外,还需从实际应用角度进行多维度验证。辨别ELISA试剂盒的好坏可以从以下几个方面进行:
1. 特异性
抗体对:高质量的ELISA试剂盒使用的抗体对中,若其中一个为多抗,另一个必须为单抗,有条件的话最好使用双单抗。这可以确保试剂盒的特异性,避免非特异性结合带来的假阳性结果。
2. 灵敏度
检测能力:灵敏度反映了试剂盒检测低浓度分析物的能力。选择试剂盒时,应根据样本中待检指标的含量选择合适的灵敏度。如果待检指标含量很低,一般的试剂盒不能满足要求,建议选择高敏的ELISA试剂盒。
3. 重复性
变异系数:科学实验讲求重复性,ELISA试剂盒的板内和板间变异系数应该控制在15%以内。优秀的ELISA试剂盒酶标板内变异系数(CV)小于5%,酶标板间变异系数小于8%。
4. 线性范围
检测范围:了解试剂盒的检测范围,确保样本浓度落在其线性检测区间内。对于浓度很高的样本,建议先通过预实验摸索出合适的稀释倍数后再大量测定。
5. 回收率
准确性验证:回收率是验证检测准确度的一个重要指标。将已知的低、中、高浓度的重组蛋白掺入到待测样本中,掺入前后测到的浓度增加部分与掺入浓度之比就是回收率。优秀的ELISA试剂盒回收率通常在80-120%之间,视为无可计量的基质干扰。
6. 稀释线性
实验线性:样本稀释后,最终分析物浓度应该相同,这个就是公认的实验线性。干扰因子会影响实验的线性,除非在研发环节克服这些干扰效应。我们为每个验证过的样本类型用试剂自带的稀释液进
注意事项
- 避免仅凭价格判断质量,部分低价试剂盒可能省略关键质检步骤。
- 查阅文献中同类产品的引用率,高引用品牌通常经过广泛验证。
通过系统评估以上参数,可显著提升实验数据的可靠性,减少后续重复验证的成本。
行系列稀释。结果用检测值和理论值的百分比表示,线性介于80-120%为理想结果。