ELISA试剂盒：避开颜色干扰的检测条件

通过调整实验参数，让检测过程不受样本颜色影响，适用于无法预处理样本的场景：

选择匹配的底物与检测波长

优先选用 “样本颜色吸收峰与底物特征波长差异大” 的组合，避开干扰。

例：溶血样本（血红蛋白在 400-420nm、540-580nm 有吸收），避免使用 ABTS 底物（特征波长 405nm），改用 TMB 底物（终止后特征波长 450nm，远离血红蛋白主要吸收峰）；

若样本呈黄色（黄疸，胆红素在 450nm 附近有吸收），可选用 OPD 底物（特征波长 492nm），或 TMB 未终止时的 650nm 波长（需确认试剂盒支持）。

设置 “样本空白对照” 校正读数

在酶标板上单独设置 “样本空白孔”，仅加入样本稀释液和样本（不加包被抗原、抗体），其他步骤与检测孔一致，最终用 “检测孔 OD 值－样本空白孔 OD 值” 计算，扣除样本本身颜色带来的背景值。

注意：样本空白孔需与检测孔加样量、温育条件完全一致，确保校正效果准确。

优化样本稀释比例

在试剂盒允许范围内，适当提高样本稀释倍数（如从 1:10 稀释至 1:50），降低单位体积内有色物质的浓度，减弱其对吸光度的影响。

前提：需通过预实验确认稀释后目标物质浓度仍在标准曲线线性范围内，避免因稀释过度导致信号丢失。此外，针对特殊样本基质（如高脂血或浑浊样本），可考虑采用物理分离技术辅助检测。例如，通过低速离心（2000-3000rpm，5分钟）去除乳糜微粒，或使用0.22μm滤膜过滤颗粒物。需注意：离心可能影响某些蛋白复合物的稳定性，建议先进行回收率验证。

对于需要快速检测的场景，可采用动力学法替代终点法。通过监测反应初始阶段的线性区间（通常前5-10分钟），利用斜率而非绝对OD值计算结果。这种方法能有效规避样本底色干扰，但要求酶标仪具备动力学模式且反应线性良好。建议预先测试反应线性范围，确定最佳读数时间窗口。

当遇到极端干扰样本时，可尝试双波长校正法（主波长/参比波长）。选择目标底物的特征波长作为主波长（如TMB终止后的450nm），再选取样本底色吸光度相近但底物无响应的波长作为参比（如620nm），最终OD值=主波长读数-参比波长读数。该方法能抵消样本浊度的影响，尤其适用于全血或组织匀浆等复杂样本。

最后需强调，所有优化方案均应通过干扰试验验证。建议制备含目标分析物与干扰物质的模拟样本，比较优化前后的回收率（80-120%为可接受范围）。记录每个批次的干扰样本处理方案，建立实验室内部标准操作规程（SOP），确保检测结果的可追溯性。对于临床样本，建议保留原始OD值与校正计算过程，便于后续数据审核。