如何优化ELISA检测的灵敏度

一、实验设计优化
‌选择高灵敏度ELISA格式‌

夹心法适用于大分子抗原检测，比直接法更敏感‌。
竞争法适合小分子检测，但需注意试剂特异性。
‌优化包被条件‌

使用高亲和力抗体，通过方阵滴定确定最佳浓度‌。
选择聚苯微孔板，确保包被载量≥300ng IgG/cm²。
二、试剂与操作优化
‌封闭剂选择‌

推荐5% BSA或脱脂奶粉，阻断非特异性结合位点‌。
避免使用与样本基质相似的封闭剂（如血清）以减少干扰。
‌洗涤液优化‌

含0.05%-0.1% Tween 20的PBS缓冲液，pH 7.4‌。
洗涤3-5次，每次静置1-2分钟，彻底去除未结合物‌。
三、信号增强技术

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化学发光法‌
通过酶促反应直接产生光信号，灵敏度比显色法高10-100倍‌。
四、常见问题解决
‌显色淡‌：检查底物活性、延长孵育时间或优化抗体浓度‌。
‌高背景‌：增加洗涤次数或更换封闭剂（如改用BSA）‌。
通过上述方法组合，可显著提升ELISA检测的灵敏度和准确性。