试剂污染：源头控制是核心

        ELISA（酶联免疫吸附测定）是一种高灵敏度的检测技术，但其结果极易受到污染干扰，导致背景值偏高、假阳性或重复性差等问题。污染源可贯穿于试剂准备、样本采集、加样孵育及洗涤等多个环节 。因此，识别并控制这些污染路径对确保数据可靠性至关重要。

试剂污染：源头控制是核心
1. 抗体/抗原污染
交叉污染：一抗、二抗储存时使用共用移液枪或容器，导致不同抗体交叉混合（如兔抗与鼠抗混用），会出现非特异性显色。
批次污染：试剂生产过程中引入的杂蛋白（如牛血清白蛋白、蛋白酶）或微生物（细菌、真菌），会干扰抗原抗体结合，表现为背景偏高或假阳性。
防控：试剂分装为单次用量，使用专用移液枪，4℃避光储存，定期检查试剂是否浑浊、沉淀。
2. 酶结合物污染
酶活性异常：HRP（辣根过氧化物酶）或ALP（碱性磷酸酶）与其他酶类交叉污染，或因反复冻融导致酶活性下降，显色时出现弱信号或无信号。
底物污染：底物溶液被金属离子（如Fe³⁺、Cu²⁺）或还原剂污染，会引发非特异性显色或显色速度异常（过快/过慢）。
防控：酶结合物与底物分开储存，避免使用金属容器，底物现配现用。

污染快速排查与解决

操作污染：细节决定成败
1. 样本处理污染
交叉污染：加样时吸头触碰样本孔边缘、共用加样槽，导致样本间交叉污染（如高浓度样本污染低浓度样本），出现假阳性。
溶血/脂血干扰：血液样本溶血释放血红蛋白，或脂血样本中的乳糜微粒，会吸附抗体或酶，导致背景升高或信号抑制。
防控：使用带滤芯吸头，加样后更换吸头，样本离心去沉淀，避免剧烈震荡。
2. 孵育与洗涤污染
孵育温度不均：37℃孵育箱温度分布不均，导致同一板内不同孔显色差异（边缘孔与中心孔信号不一致）。
洗涤不彻底：洗板机管路残留洗液、洗涤次数不足，未结合的抗体/酶残留，造成高背景或假阳性。
防控：定期校准孵育箱温度，洗板时确保每孔注满洗液，洗涤后拍干板底（避免孔间液体飞溅）。
3. 环境与耗材污染
实验室环境：空气中的尘埃、气溶胶（如操作者咳嗽、说话产生的飞沫）落入反应板，引发非特异性吸附。
耗材质量：ELISA板包被不均匀、吸头密封性差（漏液）、离心管内壁吸附蛋白，都会影响结果稳定性。
防控：实验在超净台内操作，使用无热源、低吸附的专用耗材，定期清洁实验台面和设备。

建议
为最大限度降低ELISA实验中的污染风险，推荐采取以下综合策略：

分区操作：设立独立的试剂准备区、样本处理区和检测区，各区域使用专用移液器与耗材 ；
标准化流程：严格遵循说明书操作，控制孵育温度（通常37℃）、时间与洗涤频率；
质控设置：每批次实验包含空白对照（仅稀释液）和阴性对照，若空白OD值 > 0.15 应排查污染源 ；
设备维护：定期校准移液器，清洁洗板机管路，防止残留累积