人神经小胶质细胞操作步骤

人神经小胶质细胞操作步骤：

1.将无菌的盖玻片置于细胞培养皿中，将细胞悬液接种于培养皿中进行细胞爬片，待细胞长至80%时取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室温孵育爬片20min，使细胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻断内源性过氧化物酶，室温孵育15min（一般用甲醇或蒸馏水稀释30%过氧化氢），PBS冲洗3次，每次3min。
5. 封闭血清室温孵育20min，PBS冲洗3次，每次3min。
6. 细胞特异性一抗孵育：按照抗体说明书稀释比例稀释好一抗，滴加在爬片上，于4°C湿盒中孵育一夜，PBS冲洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：选与一抗对应的二抗，按比例稀释后滴加在爬片上，37°C湿盒中孵育30min，PBS冲洗3次，每次3min。
8. 将爬片周围水渍吸干，爬片上滴加新鲜配制的DAB显色液，显微镜下观察，当出现棕黄色或棕褐色的阳性信号时用蒸馏水冲洗终止显色。
9. 复染：用Harris苏木素复染30s~1min，水洗后用1%的盐酸酒精分化，再用蒸馏水（或PBS）水洗返蓝。
10. 封片：将中性树胶滴在爬片一侧，再用盖玻片盖上，先放平盖玻片一侧再轻轻放下另一侧，以免产生气泡，封好的爬片平放置于通风厨中晾干。
11. 镜检观察。
蛋白低分子量标准（SDS法）
胰蛋白酶
乙酰磷酸二锂盐
磷酸转乙酰化酶
牛胆盐
溶酶小球菌底物
牛血红蛋白
纤维蛋白原（牛血）
纤维蛋白溶酶原（牛血）（牛纤溶酶原）
凝血酶（牛血）
尿激酶
玻璃酸酶
可溶性淀粉
酪蛋白
乳糖发酵培养基
哥伦比亚琼脂对照培养基
绿脓菌素测定用对照培养基基础
念珠菌显色对照培养基
沙氏葡萄糖琼脂对照培养基
沙门、志贺菌属琼脂对照培养基
麦康凯琼脂对照培养基
款冬酮
甘露醇氯化钠琼脂对照培养基
胆盐乳糖对照培养基
玫瑰红钠琼脂对照培养基